ПЦР: что это такое? Диагностика инфекционных заболеваний методом полимеразной цепной реакции


ИППП знакомы человечеству с древних времен, но со временем количество случаев заражения не уменьшается, а наоборот растет. По мере того, как преодолеваются «знакомые» инфекции, появляются новые. В группе риска — практически каждый человек, вне зависимости от пола и социального статуса.

Современная медицина насчитывает около 30 инфекций, которые можно отнести к ИППП. Большая часть из них может протекать бессимптомно, и это делает их весьма опасными для здоровья разных органов и систем.

Причины распространения ИППП

  • образ жизни современных людей (беспорядочные половые связи, частая смена партнеров, курение, злоупотребление алкоголем), создающий благоприятные условия для инфицирования;
  • неблагоприятная экологическая обстановка, снижение качества продуктов питания, высокий уровень стрессовых влияний негативно сказываются на работе нашей иммунной системы, облегчая задачу патогенных микроорганизмов;
  • общедоступность антибактериальных препаратов в аптечных пунктах и информации о рекомендуемых схемах терапии в интернете нередко приводит к тому, что пациенты занимаются самолечением.

О последней причине хочу сказать отдельно! Некорректные самоназначения переводят течение заболевания из острой стадии в хроническую, плохо выявляемую и поддающуюся лечению впоследствии.

В свете вышеизложенного прошу, доверьте назначения препаратов, любых, даже самых безобидных, профессионалам, имеющим базовые и специальные знания, небезразличным и регулярно повышающим свой уровень знаний.

Неверные схемы, длительное использование одного и того же препарата уже привели к тому, что многие лекарственные средства, зарекомендовавшие себя хорошо ранее, сегодня не справляются со своими функциями. Научное сообщество говорит о начале «эры антибиотикорезистентности» — невосприимчивости микроорганизмов к антибиотикам, что заставляет задуматься о поиске новых эффективных методов терапии инфекционных заболеваний.

В наше время уже не существует заболеваний, вызванных только одним микроорганизмом!

Поэтому практически всегда возникает необходимость комплексного подхода к назначению терапии, с целью одновременного воздействия на все патофизиологические процессы. Именно для того, чтобы получить о Вас полную информацию, и необходим врачебный осмотр, который, к сожалению, невозможно выполнить в рамках телемедицины.

Основа полимеразной цепной реакции

Метод ПЦР проводится исключительно в лабораторных условиях. Для его осуществления используются специальные ферменты, которые увеличивают в несколько раз структуру ДНК и РНК больного. Должно образоваться такое число ДНК и РНК, чтобы можно было провести визуальный анализ. Во время обследования происходит копирование того участка РНК или ДНК, который идеально подходит под требуемые условия.

В лаборатории существует соответствующая база данных, в которой указано точное строение различных инфекционных агентов. Благодаря методу ПЦР можно не просто увидеть возбудителя, но и подсчитать его количественное соотношение.

ПЦР-диагностика предполагает и определенные новшества, среди которых можно выделить следующие:

  • введение мутаций;
  • соединение отдельных фрагментов ДНК;
  • определение отцовства и др.

Распространенная проблема при самолечении ИППП

При появлении патологических выделений из половых путей первым делом пациентка N, решив, что у нее обострение молочницы, самостоятельно использует свечи, которые:

  • когда – то помогли при аналогичной ситуации;
  • порекомендовали подруги;
  • были прорекламированы в интернете.

Будет ли адекватным мазок, необходимый врачу для постановки диагноза, выполненный после использования препарата? Конечно, нет! И теперь, в случае если был использован антибиотик, для получения биоматериала и постановки диагноза необходим перерыв в использовании препарата в течение 14 дней!

А у пациентки N зуд, жжение (препарат не помог, иначе бы она просто не пришла)! Вот и выходит, что доктор вынужден лечить предполагаемое им, основываясь на жалобах пациентки, заболевание, что в XXI веке неприемлемо.

Уважаемые девушки, женщины, под патологическими выделениями из половых путей могут скрываться не только молочница (вульвовагинальный кандидоз), бактериальный вагиноз и аэробный вагинит, но также и ИППП, которые не лечатся свечами «от молочницы»!

Расшифровка результатов анализа

При соблюдении рекомендаций ошибки в результатах анализа методом ПЦР практически исключены. Подготовка результатов может занимать до 2 суток, однако в некоторых современных лабораториях анализы готовы уже в течение одного рабочего дня.

Результаты анализа ПЦР-12 могут быть положительными и отрицательными. Отрицательный результат свидетельствует о том, что инфекции не обнаружены. Положительный результат значит то, что в исследуемом материале присутствуют инфекционные элементы, и пациенту требуется качественное лечение. Также результат может быть положительным при носительстве инфекции, при этом проводить лечебные мероприятия нет необходимости. Какие инфекции входят в ПЦР-12 и могут быть примерами таких заболеваний? К ним относятся папилломавирусная инфекция, герпес и другие заболевания. Тем не менее важно знать, что человек, который является носителем, может заразить здоровых людей, даже если его самого данная болезнь не беспокоит.

Если в результате анализа присутствуют показатели с положительными значениями, необходимо обратиться к врачу для назначения эффективной терапии. Бывают ситуации, когда ПЦР показывает сомнительный результат, в таком случае следует сделать повторный анализ через 12-14 дней.

Кроме качественной характеристики, анализ ПЦР может иметь и количественную. С помощью количественной характеристики специалист может определить активность, стадию развития заболевания и выбирать наиболее подходящий для лечения препарат.

В чем опасность ИППП?

Клинические проявления большинства ИППП неспецифичны (не имеют характерных для конкретного заболевания особенностей), и ни один врач не сможет поставить правильный диагноз без использования лабораторных методов исследования. Поэтому, правильнее всего при появлении жалоб, провести диагностические исследования, объем которых, исходя из Ваших жалоб и данных осмотра, определит врач.

Опасность ИППП заключается в формировании, прежде всего, неблагоприятных последствий для репродуктивного здоровья женщины.

Так, бесплодие развивается в 1 из 12 случаев однократно перенесенного инфицирования, в 1 из 5 – после второго случая и у каждой второй после третьего эпизода. Внематочная беременность всегда происходит по вине перенесенного воспаления женских половых органов. Я уже не говорю о тазовых болях, нарушениях менструального цикла и прочих последствиях, которые часто остаются и тогда, когда возбудитель уже отсутствует.

Использованная литература

1. Федеральные клинические рекомендации. Дерматовенерология 2015: Болезни кожи. Инфекции, передаваемые половым путем. — 5-е изд., перераб. и доп. — М.: Деловой экспресс, 2021. — 768 с. 2. Малова И.О., Примак Н.Б., Афанасьева И.Г., Зиновьева Т.К. Острый вульвовагинальный кандидоз: старая проблема — новое решение. Клиническая дерматология и венерология. 2012;10(4) 3. Беляева Н.Р. ЦИТОМЕГАЛОВИРУСНАЯ ИНФЕКЦИЯ И РЕПРОДУКТИВНОЕ ЗДОРОВЬЕ ЖЕНЩИН. Журнал акушерства и женских болезней. 2016; 4, С. 24 – 33.

Список ИППП

К ИППП относят:

  • сифилис,
  • гонококковую инфекцию,
  • урогенитальную хламидийную инфекцию,
  • урогенитальный трихомониаз,
  • аногенитальную герпетическую вирусную инфекцию,
  • ВПЧ (читайте подробнее в статье «Обнаружен ВПЧ!»),
  • ВИЧ-инфекцию (инфекцию, вызванную вирусом иммунодефицита человека),
  • вирусные гепатиты.

Очень часто на вопрос о перенесенных ИППП, слышу ответ: «Я лежала в стационаре и меня проверяли на все инфекции, сказали, что все хорошо». Да, верно, все хорошо, иначе бы Вас проинформировали, но отрицательный результат говорит об отсутствии ВИЧ, сифилиса и вирусных гепатитов – именно данные анализы сдает человек при госпитализации в стационар, прохождении плановых медицинских осмотров, любом виде оперативных вмешательств. Но не более!

Большая часть девушек, которым еще только предстоит стать мамами, имея не одного полового партнера, ни разу не сдавали анализы на предмет обнаружения таких возбудителей, как Chlamydia trachomatis и Mycoplasma genitalium – доказанных виновников воспалительных заболеваний органов малого таза, бесплодия и внематочных беременностей.

Частота бесплодия при перенесенной и не леченной хламидийной инфекции составляет 50%, а при инфицировании Mycoplasma genitalium — более 30%.

Выражаю свое мнение: каждый новый половой партнер потенциально может являться источником инфицирования, поэтому стоит тщательно выбирать человека, с которым Вы собираетесь иметь, подчеркиваю, любой вид полового контакта. Идеально знать о состоянии его здоровья заблаговременно, равно как и своего. Но если дело уже сделано, имеет смысл проверить, не подарили ли Вам ИППП, особенно если Вы планируете иметь детей. И, пожалуйста, не забывайте о том, что каждая инфекция имеет свой инкубационный период (до момента клинических проявлений и, как правило, до возможности ее обнаружения при помощи лабораторной диагностики), который будет зависеть не только от возбудителя, но и от особенностей иммунной системы организма человека.

С большой долей вероятности можно установить наличие или отсутствие хламидий, микоплазм, трихомонад, гонококка, бледной трепонемы (возбудителя сифилиса) и даже ВИЧ (вируса иммунодефицита человека) и возбудителей вирусных гепатитов спустя месяц после незащищенного контакта. А вот факт заражения вирусом папилломы человека может быть установлен наверняка спустя 3 — 6, а то и 9 — 12 месяцев после момента инфицирования.

Какие инфекции входят в ПЦР-12

ИППП развиваются в результате воздействия условно патогенной и патогенной микрофлоры на органы мочеполового тракта. При помощи метода ПЦР возможно обнаружить заболевания, протекающие как в острой, так и в хронической форме, а также задолго до того, как появятся первые симптомы болезни. Пациентов часто интересует вопрос о том, какие инфекции входят в ПЦР-12? Перечислим эти заболевания:

  1. Гарднереллез.
  2. Хламидиоз (вызванный видом хламидия трахоматис).
  3. Микоплазмоз (вызванный микоплазмами хоминис или гениталиум).
  4. Гонорея.
  5. Кандидоз (вызванный в первую очередь грибами кандида альбиканс).
  6. Уреаплазмоз.
  7. Герпес 1 и 2 типа.
  8. Трихомониаз.
  9. Вирус папилломы человека (в том числе анализ ВПЧ 16 типа и 18).
  10. Цитомегаловирус.
  11. Анализ на гепатиты разных групп.
  12. ВИЧ-инфекция.

Анализ на ВИЧ с помощью ПЦР позволяет обнаружить инфицирование на сроках 3-4 недель.

Гинекологический мазок как метод выявления ИППП

Ежегодно все мы, я надеюсь, сдаем «мазок на флору» — исследование под микроскопом отделяемого из уретры (мочеиспускательного канала), цервикального канала шейки матки и влагалища на предмет обнаружения патогенных микроорганизмов (Neisseria gonorrhoeae, Trichomonas vaginalis), условно – патогенных (стрептококки, стафилококки, энтерококки, грибы рода Candida) и оценки преобладающей флоры, которая в норме должна быть лактобациллярной. Также в ходе микроскопии определяют количество лейкоцитов, в идеале их количество не должно быть более 10 единиц в отделяемом уретры, 20 – влагалища и 10 – из канала шейки матки. Возможно определение ключевых клеток (клеток вагинального эпителия, окруженных условно-патогенными микроорганизмами), частых спутников бактериального вагиноза (рисунок 1).

Рисунок 1 – Гинекологический мазок (инструменты для взятия и вид под микроскопом)

Напомню, что анализ сдается во время отсутствия кровянистых выделений, желательно не иметь полового контакта за 1 – 2 дня, а также не вставлять свечи, сдавать анализ до вагинального ультразвукового исследования. Ну и, естественно – не спринцеваться! Призываю Вас вообще этим не заниматься!

Итак, при микроскопии гинекологического мазка могут быть выявлены гонорея и трихомониаз. К сожалению, это далеко не весь перечень ИППП.

А между тем…

Мировая статистика насчитывает 357 000 000 новых зарегистрированных случаев инфицирования ИППП в год, что соответствует 1 000 000 случаев заражения в день!

Лидирующие позиции занимают трихомониаз (около 142 000 000 случаев инфицирования ежегодно) и хламидийная инфекция (около 131 000 000 случаев).

Вопреки расхожему мнению о малой распространенности гонореи и сифилиса, статистические данные говорят о 78 000 000 случаев инфицирования гонореей и 6 000 000 – сифилисом ежегодно.

Каковы преимущества и недостатки ПЦР-диагностики инфекций?

Преимущества исследования:

  • можно изучать любой биологический материал (клетки эпителия, кровь, мочу, слюну, сперму, выделения и пр.);
  • выявляются следы/части собственно инфекционного агента, а не продукты его распада или ответные реакции организма;
  • выявление ДНК-фрагмента, соответствующего только данному конкретному возбудителю;
  • удается обнаруживать всего несколько клеток (желательно порядка 10 – 100 в образце);
  • на все исследование уходит не более 5 часов;
  • можно диагностировать как острые, так и хронические, и бессимптомные формы заболеваний и др.

Относительные недостатки:

  • не самый дешевый метод;
  • не позволяет установить живой или неживой возбудитель обнаружен;
  • обнаруженный микроорганизм не является гарантированно причиной имеющихся проблем (благодаря высокой чувствительности обнаруживаются даже минимальные, клинически незначимые количества);
  • возможны ложноположительные/ложноотрицательные результаты;
  • предъявляет высокие требования к точности соблюдения техники проведения и к квалификации персонала.

Кому необходимо проходить обследование с целью выявления возбудителей ИППП?

  • обоим половым партнерам на этапе планирования беременности,
  • беременным,
  • сексуально активным девушкам, которые хотят стать мамами в отсроченном периоде,
  • женщинам, имевшим незащищенный контакт с сомнительным партнером,
  • женщинам, часто меняющим половых партнеров,
  • партнерам инфицированных ИППП лиц,
  • пациенткам с воспалительными заболеваниями органов малого таза и их половым партнерам,
  • пациенткам с наличием патологических выделений из половых путей,
  • пациенткам с бесплодием и потерями беременности,
  • пациенткам, которым предстоят оперативные вмешательства на органах малого таза.

Коротко коснусь в данной статье бактериальных инфекций, находящихся в ведомстве гинекологов, ИППП вирусной этиологии рассмотрены в отдельных статьях («ВПЧ обнаружен!» и ВПГ – скоро напишу). Гонорея и сифилис – сфера врачей — дерматовенерологов, а ВИЧ и вирусные гепатиты лечат коллеги – инфекционисты.

Показания для назначения ПЦР-12

ПЦР на двенадцать инфекций проводится при наличии симптомов воспалительного заболевания в органах репродуктивной системы либо с профилактической целью. Учитывая то, какие инфекции входят в ПЦР-12, проведение анализа может назначить уролог, гинеколог, венеролог. Распространенные причины для сдачи анализа:

  • Подозрительные или неприятные симптомы. К таким симптомам относятся болезненное мочеиспускание, зуд, появление сыпи, язвочек или нетипичные выделения из половых органов. Ошибочно полагать, что ИППП нельзя заразиться другими способами. Это заблуждение — партнеры могут быть здоровы и верны друг другу, а заражение произошло половым путем. Вероятность этого невелика и не превышает 5 %, но и это немало. К примеру, заразиться гонореей можно, использовав чужое полотенце. Риск возрастает при совместном проживании с носителем инфекции. Следовательно, бытовой способ заражения патогенными микроорганизмами также не стоит исключать. Важно вовремя обращаться к специалисту при любых тревожных симптомах. Период от момента заражения до возникновения первых симптомов может длиться от нескольких дней до пары неделей или даже месяцев. Но также важно помнить, что возможно и бессимптомное протекание заболевания.
  • Большое количество половых партнеров и пренебрежение средствами барьерной контрацепции. В таком случае рекомендуется проведение ежегодной диагностики с целью выяснения, присутствуют ли в организме опасные инфекции.
  • Проведение обследования при планировании беременности. Каждой паре перед зачатием рекомендуется сдать анализ ПЦР. Этот метод позволит выявить скрытые заболевания, которые могут быть переданы от матери ребенку при беременности и родах и предотвратить инфицирование.
  • Бесплодие. Половые инфекции могут приводить к нарушениям фертильности. При неспособности зачатия в течение года при условиях активной сексуальной жизни без контрацепции рекомендуется сделать ПЦР на двенадцать инфекций.
  • Операции на мочевом пузыре, простате, матке, яичниках и других органах малого таза. При хирургическом вмешательстве наличие инфекций может быть очень опасным, поскольку они могут привести к появлению осложнений после операции.

При наличии хотя бы одного из представленных выше признаков рекомендуется воспользоваться диагностикой методом ПЦР. Вовремя не обнаруженные и не пролеченные инфекционные заболевания могут приводить к появлению серьезных осложнений, таких как простатит, эпидидимит у мужчин и вагинит, аднексит у женщин. Причинами бесплодия у мужчин и женщин больше чем в половине случаев являются ИППП.

Хламидийная инфекция

В Российской Федерации в 2015 году было зарегистрировано 41,3 случаев хламидийной инфекции на 100 000 населения, что, в сравнении со средним показателем в Европе – 184 случая на 100 000 населения, говорит (по мнению ведущих экспертов РФ) не о реальной заболеваемости, а о том, что большая часть инфицированных людей не обращаются в медицинские учреждения за помощью, так как в большинстве случаев инфекция протекает бессимптомно.

При анализе уровня заболеваемости в зависимости от возраста, наибольшая приходится на категорию молодых людей: 44,7 на 100 000 – на возрастную категорию от 15 до 17 лет, и 49,7 – на репродуктивный период старше 18 лет. А между тем к частым осложнениям бессимптомно текущей хламидийной инфекции относят бесплодие! Опасность для инфицированных беременных пациенток состоит в высокой вероятности возникновения преждевременного разрыва плодных оболочек и развития преждевременных родов, рождения плода с низким весом, возможности передачи инфекции плоду (в 50% случаев при естественных родах).

Возбудителем инфекции является Сhlamydia trachomatis (рисунок 2).

Рисунок 2 — Сhlamydia trachomatis

Вероятность передачи хламидийной инфекции при однократном незащищенном половом контакте с инфицированным человеком не превышает 10%, тогда как при регулярной половой жизни в течение двух месяцев – составляет уже 55%. Вот почему необходимо лечить обоих партнеров. Инкубационный период может длиться от 1 до 4 недель.

В 70 – 95% случаев инфекция протекает бессимптомно. Симптомы инфекции неспецифичны и могут проявляться общей слабостью, повышенной утомляемостью, патологическими выделениями из половых путей, болями внизу живота, нарушениями цикла, контактными кровянистыми выделениями (возникающими после полового контакта), резями при мочеиспускании, учащенным мочеиспусканием. Возможно развитие реактивного артрита. При осмотре в зеркалах врач-гинеколог часто видит признаки цервицита (воспаления в цервикальном канале) и отечности слизистой шейки матки.

Исследование крови не должно применяться для диагностики. Используют метод амплификации нуклеиновых кислот (NASBA, nucleic acid sequence based amplification), ПЦР (полимеразная цепная реакция) и ПЦР в реальном времени (ПЦР-РВ), материалом служат отделяемое (соскобы) из уретры и цервикального канала, а также первая порция свободно выпущенной мочи.

Диагностика

Возбудителей, которые входят в группу ИППП, достаточно много. Современная медицина предлагает немало методов диагностики, с помощью которых можно их обнаружить и назначить эффективную схему лечения. Условно их можно разделить на несколько групп:

  • микроскопические методы;
  • анализы крови;
  • культуральные методы или посевы;
  • ДНК-диагностика.

После обнаружения симптомов, которые указывают на наличие половой инфекции, необходимо сразу же обратиться к врачу. Женщины должны записаться на прием к гинекологу, пациенты мужского пола — к урологу. Если есть явные признаки венерической болезни (шанкры или другие высыпания на половых органах), нужно отправиться к врачу-венерологу.

Невзирая на обширный выбор методов диагностики, точного лабораторного метода пока не существует. При подозрении на ИППП нельзя обойтись одним методом — чаще всего их используют в комплексе для наиболее достоверного результата. Нередко диагностика занимает немало времени со стороны пациента.

Первое, что должен сделать человек, которого беспокоят симптомы половой инфекции — сдать мазок на микрофлору. Это стандартная процедура, которая также проводится при плановом осмотре у гинеколога или уролога. У мужчин мазок берется из мочеиспускательного канала, у женщин — из влагалища и уретры.

К самым простым методам относится также бактериальный посев. Врач берет на анализ определенное количество секрета половых органов. Взятый материал помещается в питательную среду, которая способствует быстрому размножению бактерий: как «правильных», так и болезнетворных.

Кроме микробиологического анализа при необходимости назначается иммуноферментный анализ (ИФА). С его помощью можно выявить антитела, с помощью которых организм борется с ИППП. При некоторых заболеваниях, которые поражают весь организм (сифилис, ВИЧ), проводится анализ крови (определение ВИЧ и реакция Вассермана).

Наиболее точный метод диагностики — ПЦР (полимеразная цепная реакция). Он позволяет выявить скрытые заболевания, характеризующиеся бессимптомным течением. Инфекция обнаруживается с помощью анализа ДНК. Этот метод эффективен при подозрении на ВПЧ и другие заболевания, которые длительное время могут находиться в организме в «спящем» состоянии.

Кроме обследования узкопрофильных специалистов, больным ИППП иногда может понадобиться помощь других врачей. Некоторые заболевания поражают не только мочеполовую систему, но и другие органы. Это касается таких инфекций как:

  • ВИЧ;
  • сифилис;
  • ВПЧ, герпес и т. д.

Они могут затрагивать зрение, суставы, кожные покровы, кровеносную систему, задний проход. В зависимости от вида осложнений необходимо обратиться к иммунологу, проктологу, дерматологу, инфекционисту и другим специалистам.

Важно помнить, что в случае с ИППП поставить диагноз может только врач. Многие заболевания имеют почти идентичную симптоматику, поэтому самолечение может только усугубить ситуацию и привести к опасным осложнениям.

Заболевания, вызванные Mycoplasma genitalium (микоплазменная инфекция)

Частота выявления Mycoplasma genitalium (рисунок 3) в общей популяции составляет от 1 до 5%, тогда как у женщин с высоким риском инфицирования – до 42%. Инфицирование происходит при контакте слизистых оболочек половых органов, аногенитальной области и полости рта. В 40 — 70% случаев заболевание протекает бессимптомно, в остальных случаях – клиническая картина такая же, как и при хламидийной инфекции.

Рисунок 3 — Mycoplasma genitalium

Осложнениями являются воспалительные заболевания органов малого таза и внематочная беременность. И хламидии и микоплазмы повреждают реснитчатый эпителий маточных труб, необходимый для продвижения оплодотворенной яйцеклетки в полость матки. В связи с тем, что маточной трубе попросту нечем обеспечить движение яйцеклетки, беременность развивается в трубе, формируется опасное для жизни состояние.

При возникновении беременности инфицирование Mycoplasma genitalium увеличивает риск невынашивания, преждевременных родов. Диагностика такая же, как и при хламидийной инфекции.

В данной статье намеренно не привожу рекомендуемых на сегодняшний день схем терапии, так как считаю необходимым очное посещение врача. Оценку эффективности проведенного лечения (подтверждение факта отсутствия микроорганизма) обеих инфекций не стоит проводить ранее, чем через 2 недели при использовании NASBA, или месяца после окончания курса терапии — ПЦР, ПЦР-РВ, при отрицательном результате повторный скрининг не обязателен!

Симптомы

Есть семь основных признаков, которые указывают на ИППП. При их обнаружении необходимо немедленно обратиться к врачу: гинекологу или урологу. Доктор проведет первичный осмотр и назначит дальнейшие анализы и обследования.

О наличии ИППП могут свидетельствовать:

  • жжение и зуд в интимной области;
  • боль или дискомфорт во время секса;
  • измененные выделения из половых органов;
  • боль в нижней части живота;
  • частое и болезненное мочеиспускание;
  • высыпания и покраснение в интимной зоне;
  • увеличение лимфатических узлов.

Инфекций, передающихся половым путем довольно много, и каждая из них проявляется по-разному. Для их описания понадобится целый медицинский справочник. Здесь мы рассмотрим только самые распространённые ИППП, заразиться которыми может каждый человек на планете, вне зависимости от пола, возраста и социального статуса.

Сифилис — инфекционное заболевание, которое известно человечеству с древних времен. Возбудителем является бактерия под названием «бледная спирохета». Заразиться сифилисом можно при любом половом контакте. Первые симптомы появляются через 10 дней после инфицирования — на половых органах или промежности (реже — других участках тела) возникает твердый шанкр. Со временем аналогичные высыпания появляются в ротовой полости и на пальцах рук. Наблюдается значительное увеличение лимфатических узлов, особенно паховых и шейных.

Всего выделяют три стадии сифилиса. При отсутствии своевременного лечения заболевание может перейти в более тяжелую форму. В результате язвы распространяются по всему телу, в том числе и слизистых оболочках. Больного беспокоят воспалительные процессы, головные боли, ломота в костях, ухудшением общего самочувствия. На третьей стадии может возникнуть менингит — воспаление оболочек головного мозга. Осложнения сифилиса могут привести к параличу и даже летальному исходу.

Хламидиоз — одно из самых коварных заболеваний, передающихся половым путем. У большинства людей ранних стадиях болезни симптомы фактически отсутствуют. У женщин они менее заметны, чем у мужчин, а могут и вовсе не проявляться. Тем не менее, хламидии — одна из главных причин, которая приводит к внематочной беременности, воспалительным процессам в органах малого таза и женскому бесплодию.

У пациентов мужского пола хламидиоз проявляется рядом характерных симптомов. Их беспокоит режущая боль при эякуляции и мочеиспускании. Это обусловлено воспалением придатков яичек и мочеиспускательного канала, которые вызывают бактерии.

Гонорея — еще одна достаточно распространенная ИППП, особенно среди людей в возрасте от 15 до 24 лет. Как и хламидии, она может распространяться при оральном, вагинальном или анальном контакте. И так же, как и при хламидиозе, большинство инфицированных женщин на первых стадиях не замечают никаких симптомов. Однако у мужчин гонорея проявляется практически сразу же. Больных беспокоят гнойные выделения из уретры, болезненное и частое мочеиспускание, дискомфорт в области анального отверстия.

При отсутствии своевременной терапии гонореи возникают осложнения. У женщин наблюдаются кровянистые выделения после секса и режущая боль во время него, повышается температура тела и ухудшается общее состояние организма. Гонорея на любой стадии требует быстрого и эффективного лечения.

Трихомониаз — бактериальная инфекция, возбудителем которой является Trichomonas vaginalis. Поначалу заболевание никак себя не выдает. Первые симптомы появляются приблизительно через две недели после инфицирования. Мужчины чувствуют жжение в мочеиспускательном канале, могут появиться выделения из пениса.

У женщин трихомониаз проявляется более явно. Больных беспокоят болезненные ощущения при половом акте, что обусловлено воспалением слизистых оболочек половых органов. Один из характерных симптомов — густые желто-зеленые выделения из влагалища с неприятным запахом.

Генитальный герпес — вирусное заболевание с крайне высокой восприимчивостью. Передается не только при половом акте, но и при контакте «кожа с кожей». Возбудитель — вирус простого герпеса 2 типа (ВПГ-2). Через сутки после заражения появляются маленькие пузырьки на наружных половых органах. Они сопровождаются зудом и легким пощипыванием. В следующие несколько дней происходит превращение пузырьков в болезненные язвочки, наблюдается лихорадка и увеличение лимфатических узлов.

Высыпания — лишь видимая часть болезни. Даже после их исчезновения вирус герпеса остается в организме на всю жизнь. Отсутствие лечения у беременных женщин может привести к серьезным осложнениям, вплоть до смерти плода.

Вирус папилломы человека (ВПЧ) — вирусы, передающиеся половым путем. ВПЧ 16-го и 18-го типов являются одной из главных причин возникновения рака шейки матки у женщин. Вне зависимости от пола заболевание проявляется одинаково — в виде мелких бородавок в области промежности и анального отверстия. У мужчин они могут скрываться за крайней плотью и в мочеиспускательном канале. Не исключено и бессимптомное протекание болезни. В этом случае о наличии инфекции можно узнать только с помощью специальных анализов.

Уреаплазмоз — заболевание, которое склонно к хроническому течению. Возбудителем является одноклеточный микроорганизм под названием уреаплазма. Современная медицина относит его к условно-патогенной флоре. Это значит, что в небольшом количестве уреаплазма присутствует и у здорового человека. Заболевание начинается, когда микробы переходят в активное состояние и стремительно размножаются, тем самым вытесняя здоровую микрофлору.

Первые симптомы появляются через 14-20 дней. У больных наблюдается воспаление мочеполовой системы, жжение при мочеиспускании, мутные выделения из влагалища. Женщин может беспокоить боль внизу живота и цервицит. Со временем заболевание переходит в хроническую форму, что влечет за собою множество осложнений:

  • кольпит;
  • эндометрит;
  • стриктуру (сужение) уретры;
  • воспаление маточных труб;
  • цистит и т. д.

Несвоевременное лечение инфекции нередко приводит к бесплодию, замершей беременности и преждевременным родам.

Микоплазмоз — как и уреаплазмоз вызывается условно-патогенными микроорганизмами, которые могут находится в организме здорового человека в «спящем» состоянии. Тем не менее, иногда микоплазмы провоцируют ряд заболеваний мочеполовой системы. У женщин они проявляются тянущими болями внизу живота, жжением при мочеиспускании и болью во время полового контакта.

ВИЧ или вирус иммунодефицита человека — самое опасное заболевание, передающееся половым путем. ВИЧ дает о себе знать далеко не сразу — инкубационный период заболевания длится от 21 до 90 дней. Симптомы возникают только на стадии манифестации инфекционного процесса.

Пациенты жалуются на воспаление лимфатических узлов, хроническую слабость, головные боли и потерю аппетита. Характерный признак ВИЧ — воспаление небных миндалин (ангина), которое не проходит длительное время. У больных повышается температура тела до 37-37,5 градусов, при этом нормализовать её с помощью жаропонижающих средств не удается.

Отсутствие антиретровирусной терапии крайне негативно сказывается на состоянии больного. Организм атакуют всевозможные вирусные и бактериальные заболевания: пневмония, герпес, туберкулез, кандидоз. Как следствие развивается СПИД.

Заболевания, вызванные Mycoplasma hominis и Ureaplasma species

Что до таких, часто обнаруживаемых микроорганизмов, как Mycoplasma hominis и Ureaplasma species (рисунок 4), их относят к условно-патогенным, то есть их присутствие в небольшом количестве у здорового человека допустимо. При отсутствии клинических проявлений лечению подлежат пациенты, страдающие бесплодием, женщины с потерями беременности в анамнезе, а также доноры спермы. А вот признаки цистита, уретрита и цервицита, а также восходящего инфицирования – показание к терапии. При этом эффективно проведенным лечением считается отсутствие клинических и лабораторных признаков воспалительного процесса, а не отсутствие микроорганизмов.

Рисунок 4 — Ureaplasma species

Методы выявления такие же, как и при хламидийной и микоплазменной инфекции, материалом для исследований также могут служить вагинальные выделения.

Способы передачи ИППП

ИППП распространяются половым путем — вагинальным, оральным или анальным. Пол человека значения не имеет — они могут перейти от мужчины к женщине, от женщины к мужчине, от мужчины к другому мужчине или от женщины к другой женщине.

Многие половые инфекции могут распространяться через любой контакт между половыми органами, ртом и анусом, даже если нет проникновения. Например, генитальный герпес передается через прямой контакт кожи с кожей — для заражения достаточно микроповреждений на её поверхности.

Некоторые ИППП передаются и другими способами. Например, ВИЧ и гепатит B передаются через совместное использование игл для инъекций и при переливании крови.

Использование барьерных методов контрацепции не всегда является гарантией безопасности. При использовании презервативов для безопасного секса важно следовать инструкциям, которые указаны на упаковке. Правильное использование презервативов делает их более эффективными. Необходимо соблюдать следующие меры предосторожности:

  • проверять срок годности и целостность упаковки;
  • одевать презерватив до секса, а не во время него;
  • использовать смазку во время полового акта с презервативом;
  • правильно снимать и утилизировать презерватив;
  • никогда не снимать презерватив и пробовать снова его надеть;
  • никогда не использовать презерватив повторно.

Подготовка к ПЦР на 12 ИППП

Перед сдачей анализов на ИППП 12 инфекций пациенту необходимо:

  • воздерживаться от мочеиспускания на протяжении 3 часов (для мужчин) или 1,5 часов (для женщин);
  • в течение 2 недель не принимать антибактериальные препараты;
  • воздерживаться от секса в течение 36 часов перед исследованием;
  • в день сдачи анализов не использовать дезинфицирующие и антибактериальные средства;
  • воздержаться от употребления спиртного за 3 дня до исследования.

Женщинам также стоит учитывать, что процедуры невозможны во время менструации, а в день сдачи анализов нельзя ставить свечи или тампоны, проходить кольпоскопию, спринцевание, биопсию, УЗИ вагинальным датчиком.

Виды ПЦР

К сегодняшнему дню на вооружении медицины появилось более десятка различных видов полимеразной цепной реакции: рекомбиназная, вложенная, инвертированная, ассиметричная, ступенчатая, групп-специфическая, с обратной транскрипцией, с «горячим стартом» и так далее – все они разработаны с учетом конкретных диагностических требований. Человеку несведущему в молекулярной биологии было бы сложно, да и скучно разбираться в тонкостях этой типологии. По настоящему интересны те виды ПЦР, которые широко используются на практике и активно предлагаются пациентам. Вот об этих анализах давайте и поговорим подробнее.

ПЦР 12

Рекордсменом по популярности заслуженно выступает так называемый комплексный анализ ПЦР 12 – он называется так потому, что включает в себя 12 наиболее распространенных половых инфекций, а также контрольный тест на качество взятых материалов (КВМ).

Почему этот вид диагностики так актуален?

Во-первых, потому что он соответствует печальным реалиям нынешнего времени, когда у одного пациента кожно-венерологического профиля обнаруживается целый «букет» нехороших болячек. Во-вторых, потому что лабораториям проще пользоваться готовым картриджем, который содержит сразу все необходимые праймеры. В-третьих, это выгоднее для самого пациента, поскольку комплексный анализ обойдется дешевле, чем обследование на наличие каждой ИППП по отдельности.

Как сдают анализ ПЦР 12?

У мужчин берут мазок из уретры. Это не очень приятная, но вполне терпимая и быстрая манипуляция. У женщин берут эпителиальный соскоб из влагалища или с шейки матки. Эта процедура, как правило, не вызывает болезненных ощущений. О правилах подготовки к визиту в лабораторию читайте ниже.

Стандартный набор ПЦР 12 выглядит следующим образом:

  • Вирусы герпеса 1 и 2 типа;
  • Папилломовирусы 16 и 18 типа (онкогенные);
  • Микоплазмы двух типов – человеческая и генитальная;
  • Цитомегаловирус;
  • Уреаплазма;
  • Хламидия;
  • Трихомонада;
  • Гонококк;
  • Кандида.

Тринадцатым в этом списке выступает КВМ – контроль взятия мазка, который осуществляется путем поиска гена HMBS. Им обладают эпителиальные клетки, выстилающие уретру. Когда мазок берут из другого места, ищут другой ген. Если в образце будет обнаружено 250 и более копий нужного гена, значит, анализ ПЦР 12 взят корректно, и его итогам можно доверять. Если же копий специфического гена будет меньше нормы, лучше пройти повторную диагностику во избежание ложноотрицательного результата. Что касается положительных ответов, то они принимаются за истину в любом случае.

Список возбудителей, исследуемых в рамках анализа ПЦР 12, может отличаться в разных лабораториях. Например, туда могут быть включены дополнительные типы вируса герпеса или папилломовируса, тогда анализ будет называться «ПЦР 13» или «ПЦР 14». Иногда перечень, наоборот, сокращается до «ПЦР 4» (гонорея-трихомониаз-хламидиоз-микоплазмоз).

ПЦР качественная и ПЦР количественная

У этих двух видов ПЦР-диагностики принципиально разные цели: качественный анализ дает ответ на вопрос, имеется ли вообще у пациента искомый микроб, то есть просто «да» или «нет». Только что рассмотренный комплекс ПЦР 12 относится как раз к этой категории.

Но существует еще количественный анализ, или ПЦР в режиме реального времени. Метод основывается на том, что число новых ампликонов (копий заданного участка ДНК возбудителя болезни) прямо пропорционально их исходному количеству. То есть если в пробе с самого начала было много вредоносных молекул ДНК, то с каждым циклом полимеразной цепной реакции их будет становиться вдвое больше, а к концу процесса накопятся миллионы. Современные приборы амплификаторы следят за тем, как меняется количество копий, и по итогам исследования вычисляют примерную концентрацию возбудителя в организме пациента.

Для чего это нужно? В случае с бактериями, простейшими или грибками подобные сведения имеют спорную диагностическую ценность, поскольку численность колоний постоянно меняется под воздействием самых разных факторов, да и уничтожить такие микроорганизмы сравнительно просто. Другое дело – вирус. Это неклеточная форма жизни, которую невозможно истребить подобно тому, как антибиотики справляются с бактериями. В борьбе с вирусами человек может твердо рассчитывать только на свой иммунитет, а возможности противовирусных средств сильно ограничены. Именно когда дело касается вирусов, становится особенно актуальной методика ПЦР в режиме реального времени.

Вирусная нагрузка или виремия – это степень тяжести поражения организма вирусом. Показатель рассчитывается путем определения числа вирионов в биологическом материале, измеряется в МЕ или в количестве копий на 1 мл крови и служит для контроля над ходом терапии и предупреждения распространения вируса.

ПЦР количественная критически необходима носителям следующих инфекций:

  • Вирус иммунодефицита человека (ВИЧ);
  • Гепатит B и C.

Но и в случае с другими вирусами определение нагрузки может оказаться полезным – например, когда речь идет о цитомегаловирусе, герпесе или папилломовирусе. Анализ поможет понять, грозит ли человеку очередное обострение болезни, и насколько высока вероятность передачи инфекции.

ВИЧ-инфицированным людям назначается антиретровирусная терапия. Ее цель – максимально снизить вирусную нагрузку, а в идеале – сделать ее неопределяемой. Но даже в этом случае существует риск заразить своего полового партнера или партнершу, поэтому не следует пренебрегать использованием презервативов.

[Видео] Вирусная нагрузка и её отслеживание для ВИЧ-инфицированных:

Откуда и как берется материал для исследования ПЦР 12

Провести ПЦР-исследование можно практически для любого биоматериала.

эппендорф для ПЦР мазка

Для получения образца берутся соскобы из мочеиспускательного канала, влагалища, маточной шейки.

При этом правильная методика взятия биоматериала имеет очень важное значение.

Поскольку ПЦР очень точный метод, то попадание в исследуемую пробу посторонних примесей может исказить итоговые данные (ложноположительный результат).

Аналогично, если нарушена техника забора и материал взят не с подходящего участка, в пробу возбудитель не попадет и результат окажется ложноотрицательным.

Например, у женщин возбудители гонококковой инфекции обычно размещаются в канале шейки матки, а во влагалище могут отсутствовать.

У мужчин инфекционные агенты могут существовать в предстательной железе, придатках яичек при полном отсутствии в мочеиспускательном канале.

Стоит отметить, что применяемые ранее техники провокации (предполагаемого увеличения количества возбудителей при действии различных факторов) сейчас не используются ввиду неэффективности.

Для забора материала из органов урогенитального тракта применяются вагинальные тампоны и специальные зонды.

Подготовка к исследованию методом ПЦР на 12 инфекций зависит от исследуемого материала.

ПЦР — что это такое?

Любое живое существо на Земле, будь то человек, животное или микроб, имеет гены – носители наследственной информации, которые представляют собой участки ДНК или РНК с определенной последовательностью нуклеотидов, уникальной для каждого организма. ДНК (дезоксирибонуклеиновая кислота) и РНК (рибонуклеиновая кислота) образует длинные молекулы, состоящие из двух нитей, закрученных в спираль друг относительно друга, и эти нити собираются из нуклеотидов, как из бусинок.

Допустим, требуется увидеть, есть ли в биологическом материале пациента ДНК или РНК инфекционного возбудителя или ее фрагменты. Но как это сделать, если молекулы крошечные и их мало? Методика ПЦР дает ответ: можно искусственно размножить вредоносную ДНК или РНК в лабораторных условиях, чтобы без труда ее обнаружить и идентифицировать.

Суть полимеразной цепной реакции состоит в том, чтобы разъединить нити молекул и попытаться «подсадить» к их противоположным концам фрагменты ДНК или РНК возбудителей – если они подойдут, значит, это и есть искомый микроб. А добавленный в пробирку фермент под названием «ДНК-полимераза» запустит синтез новых копий нужных участков молекул, они многократно размножатся и станут заметны. Далее мы опишем простыми словами, как происходит этот удивительный процесс и для чего это необходимо.

Американский ученый Кэрри Муллис изобрел ПЦР в 1983 году, а спустя десять лет, в 1993 году, получил за свое открытие Нобелевскую премию по химии. Однако методика была несовершенной и требовала существенных доработок. На сегодняшний день существует уже более десятка видов ПЦР для разных диагностических целей.

В случае с ПЦР-диагностикой в режиме реального времени (Real-Time PCR) влияние человеческого фактора на итоги исследования минимально – пробирки помещаются в современный высокотехнологичный прибор и ни разу не открываются на протяжении всех циклов, включая анализ результатов, который тоже проводит умная машина. У этого способа только два очевидных недостатка – высокая стоимость и ограниченная доступность, поскольку амплификаторами нового поколения оснащена далеко не каждая лаборатория.

[Видео] Наглядная информация — что такое ПЦР, и как происходит процесс?

Что сдают на ПЦР-анализ?

При выборе типа биоматериала для диагностики врачи ориентируются на специфику инфекции, на ее излюбленную локализацию. Ведь от того, попадет ли вредоносная ДНК в пробу, зависит то, будет ли получен достоверный результат анализа.

Для ПЦР берутся следующие материалы:

  • Мазок

    или эпителиальный соскоб со слизистых оболочек. Это может быть уретра, влагалище, шейка матки, цервикальный канал, анальное отверстие, ротовая, носовая и даже глазная полость. Мазки наиболее актуальны при диагностике заболеваний, передающихся половым путем. Для взятия мазка или соскоба используются зонды с разными наконечниками;

  • Кровь

    из вены берут, когда нужно обнаружить ВИЧ, гепатит, цитомегаловирус, мононуклеоз или какое-либо заболевание бактериальной этиологии, например, сифилис, холеру или боррелиоз;

  • Биологические жидкости

    (моча, слюна, сперма, мокрота, секрет предстательной железы, желудочный сок, плевральная, суставная, спинномозговая или амниотическая жидкость, а также бронхоальвеолярный лаваж) берутся по показаниям. Например, ПЦР-анализ мокроты используется при диагностике туберкулеза;

  • Пунктаты и биоптаты

    органов и тканей, как правило, берутся при подозрении на онкологию. Исключение составляет биопсия желудка, которую проводят для определения наличия Helicobacter pylori – бактерии, вызывающей гастрит и язвенную болезнь.

Что сдают на ПЦР анализ

Хранение и транспортировка биоматериалов

Пробы подлежат отправке в амплификатор не позднее, чем через 2 часа после забора, если они находятся в помещении при комнатной температуре. Когда ПЦР-анализ нужно по какой-то причине отложить, пробирки с биоматериалами допустимо оставить в холодильнике на одни сутки при температуре 2 – 8°С. Максимальный срок хранения – 14 дней, но тогда пробы подвергаются глубокой заморозке (-20°С). После оттаивания они должны быть сразу использованы, повторное замораживание запрещено.

В подавляющем большинстве случаев ПЦР-диагностика проводится «день в день»: пациент приходит в клинику, где у него берут мазок или кровь и сразу отправляют биоматериал в лабораторию, поэтому беспокоиться о правилах хранения не стоит.

Результаты ПЦР-анализа

Выше мы упоминали о качественной и количественной ПЦР-диагностике, так вот, в первом случае расшифровка результатов не представляет никакой трудности: ответ либо положительный, либо отрицательный. И если условия подготовки, сбора биоматериала, проведения анализа и оценки итогов не были нарушены, то нет и причин сомневаться в достоверности полученных данных.

По-другому дело обстоит в случае с ПЦР количественной. Ее результатом является число, демонстрирующее вирусную нагрузку. Измеряется виремия в МЕ/мл или в копиях/мл, при этом в одной МЕ (международной единице) содержится примерно 4 копии вируса (точную цифру нужно узнавать в лаборатории, проводившей анализ, поскольку оборудование у всех разное).

Например, для гепатита C вирусная нагрузка до 600 000 МЕ/мл считается низкой, 800 000 МЕ/мл – средней, а 1 000 000 МЕ/мл – уже высокой.

В некоторых клиниках для большей компактности результатов количественного анализа ПЦР используют записи следующего вида: 3*103 МЕ/мл, 4*104 МЕ/мл, 5*105 МЕ/мл и так далее. Чтобы понять, о какой цифре идет речь, достаточно произвести умножение.

Рейтинг
( 2 оценки, среднее 4.5 из 5 )
Понравилась статья? Поделиться с друзьями: